第一章基因工程：通过工具酶，在体外将目的基因、基因片段或其他DNA元件进行切割，与适当的载体进行连接和重组，导入相应的受体细胞，并使外源基因进行复制和表达，定向改造受体生物性状或获得表达产物。一个克隆：从一个亲本细胞增殖而来的细胞群体。1997年转基因番茄上市，俗称“百日鲜”。DNA的组成：五碳糖，即脱氧核糖；磷酸基团；4种含氮碱基。RNA聚合酶：核心酶和。因子。转录终止子：依赖p因子，不依赖p因子。起始密码：AUG终止密码：UAA,UAG,UGA亚克隆：初始克隆中的外源DNA片段往往较长，具有许多目的基因以外的DNA片段，在诸如表达、序列分析和突变等操作中不便进行，因此必须将目的基因所相应的小段DNA找出来，这个过程就叫亚克隆。原核生物基因组成：启动区，SD区，基因区，转录终止子和终止因子；真核生物基因组成：转录启动区，基因区，转录终止子。结构基因：转录启动区，核糖体辨认区，编码区，转录终止区。第二章限制作用实际就是限制酶降解外源DNA，维护宿主遗传稳定的保护机制。甲基化是常见的修饰。宿主细胞通过甲基化作用达成辨认自身遗传物质和外来遗传物质的目的。命名：依次取宿主属名第一字母、种名头两个字母、菌株号、序号（罗马字）。4限制与修饰系统的比较II（所占比例最大）II酶分子内切酶与甲基化酶三亚基双功能酶二亚基双功能酶分子不在一起辨认位点4-6bp,大多数为二分非对称5-7bp非对称回文对称结构切割位点在辨认位点中或无特异性，至少在在辨认位点下游24-26bp靠近辨认位点辨认位点外10bp限制反映与分开的反映互斥同时竞争甲基化反映限制作用是否是是否需用ATP辨认序列（大都为回文对称序列）辨认的长度一般为4-8个碱基，6个为常见。EcoRIG1AATTCHindIIIA1AGCTTBamHIGIGATCC同裂酶：辨认相同序列的限制酶称为同裂酶，但它们的切割位点也许不同。同尾酶：许多不同的限制酶切割DNA产生的末端是相同的，且是对称的，即它们可产生相同的粘性末端，这些酶统称为同尾酶。一个单位酶：是指在建议使用的缓冲液及温度下，在20ul反映液中反映1h，使lugDNA完全消化所需的酶量。位点偏爱:某些限制酶对同一底物中的有些位点表现出偏爱性切割，即对不同位置的同一个辨认序列表现出不同的切割效率，这种现象称作位点偏爱。常规缓冲液：稳定PH的缓冲剂、镁离子、DTT、BSA终止酶切的方法：EDTA可螯合镁离子，终止酶切反映，终止浓度为10mmol/L;加热;用苯酚抽提去出蛋白，或用试剂盒纯化DNA。星星活性：在极端非标准条件下，限制酶能切割与辨认序列相似的序列，这个改变的特殊性称星星活性。引起其因素：甘油浓度高，酶过量，离子强度低，PH过高，加有机溶剂，其它2价离子代替镁离子。12：切酶：有些限制酶只切割双链DNA中的一条链，产生单链缺，即缺酶，命名时要在前面加N。13.DNA聚合酶的种类真核细胞：DNA聚合酶以、DNA聚合酶。、DNA聚合酶丫、线粒体DNA聚合酶原核细胞：DNA聚合酶1、DNA聚合酶11、DNA聚合酶111大肠杆菌DNA聚合酶1、KlenowDNA聚合酶、T4噬菌体DNA聚合酶、T7噬菌体DNA聚合酶、耐热DNA聚合酶、反转录酶、末端转移酶——依赖于DNA的RNA聚合酶涉及SP6噬菌体DNA聚合酶、T4噬菌体DNA聚合酶、T7噬菌体DNA聚合酶——RNaseOne是唯一可在所有4个碱基处切割磷酸二酯键的酶。14.DNA连接酶的反映条件：Tris-HCl501mmol/LpH7.5MgCl210mmol/LATP0.51mmol/LDTT5mmol/LVolume1020mlT4-25摄氏度16为最适酶切位点、循环数的计算第三章载体：将外源DNA或目的基因携带入宿主细胞进行扩增或表达的工具。基因克隆：运用重组DNA技术分离目的基因基因文库：由大量的具有基因组DNA（即某一生物的所有DNA序列）的不同DNA片段的克隆所构成的群体。质粒载体的基本特性：①染色体外的遗传因子，能进行自我复制【通常一个质粒具有一个与相应的顺式作用控制要素结合在一起的复制起始区（整个遗传单位定义为复制子）】。②大多数为超螺旋的双链共价闭合环状DNA分子少数为线性③大小一般为1-2kb④许多质粒带有特殊功能表现出多样化的表型特性，如抗生素的抗性⑤质粒拷贝数分为严谨型与松驰型⑥质粒具有不相容性，即两个质粒在同一宿主中不能共存的现象⑦质粒具有转移性载体的基本要素（必备条件）：①有复制起点②具有若干个限制性内切酶的单一辨认位点③具有合适的筛选标记④具有合适的拷贝数目⑤分子量要相对较小⑥在细胞内稳定性要高⑦易分离纯化⑧必须要安全，无传染性标记基因代号：（1）.氨苄青霉素抗性基