植物叶片的脱分化和再分化培养[实验目的]掌握无菌操作方法，将烟草叶片培养成愈伤组织并进一步分化成幼苗。[实验用品]1.仪器：超净工作台、无菌滤纸、剪刀、镊子、大培养皿、无菌烧杯。2.材料：烟草无菌苗和室外培养的烟草幼苗。3.试剂：75%酒精、0.1%升汞、无菌水。[实验步骤]1）操作前用温水和肥皂将手充分擦洗干净，再用75%酒精消毒，尽量做到不带菌；2）将装有无菌苗的培养瓶用75%酒精消毒后放在超净工作台上备用。将室外培养的烟草先用自来水洗净后，用75%酒精消毒30~60s，于0.1%升汞中消毒5~10min，在于无菌条件下用无菌水冲洗4~5遍，用无菌滤纸吸干后备用；3）将上述材料在无菌条件下剪成0.5cm×0.5cm大小，接种于诱导培养基MS+BA1.0+NAA0.1中诱导愈伤组织，在此培养基上能诱导出愈伤组织并能长出小芽；4）将培养的带有愈伤组织的小芽接种在MS基本培养基中，芽能长成幼苗并且能生根。[注意事项]1.操作前要洗手，进入超净工作台后手要用75%酒精擦拭。试剂瓶等瓶口也要擦拭。2.点燃酒精灯，操作在火焰附近进行，耐热物品要经常在火焰上烧灼，金属器械烧灼后，要冷却后才能夹取组织，以免烧焦组织。3.不能用手触已消毒器皿的工作部分，工作台面上用品要布局合理。4.升汞是剧毒药品，一定不要直接用手接触，用完后要放在回收的容器中，不能直接倒入下水道中。[实验报告]观察并记录接种的烟草脱分化的情况，分析讨论下述问题：1.接种的烟草组织有无污染？为什么？2.愈伤组织细胞是否出现绿色？讨论其来源与影响。3.烟草组织经过分化培养、长出完整的植株，说明什么问题？在理论和实践中有何价值？